EFEITO DO USO DE LIPOFECTAMINE™ 2000 E POLIETILENOIMINA (PEI) NA TRANSFECÇÃO E EXPRESSÃO DA PROTEÍNA FLUORESCENTE VERDE EM FIBROBLASTOS BOVINOS CULTIVADOS IN VITRO

Resumo

A transferência nuclear de células somáticas (TNCS) associada a transgênese constitui promissora ferramenta na geração de bovinos com características de interesse zootécnico, contudo o estabelecimento de métodos eficientes de transfecção das células doadoras de núcleo e de linhagens celulares transgênicas ainda enfrenta dificuldades. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência dos carreadores de DNA Lipofectamine^TM 2000 e Polietilenoimina (PEI) na transfecção de fibroblastos bovinos cultivados in vitro com vetores plasmidiais contendo o transgene da proteína verde fluorescente (GFP). Após incubação a 37,0°C, 5% CO₂ e 95% de umidade, os fibroblastos bovinos em 80% confluência em meio de cultivo sem SFB e antibiótico foram transfectados com Lipofectamine ^TM 2000 ou PEI por 5h. As células foram avaliadas após 48, 96, 192, 264 e 384h após transfecção quanto à expressão da GFP em microscopia epi-fluorescente. As amostras foram tripsinizadas e analisadas quanto à viabilidade (48h pós-transfecção) por coloração com Azul de Trypan em microscopia de campo claro. Um grupo de células sem exposição aos agentes de transfecção foi utilizado como controle. Os resultados foram analisados por ANOVA. Encontrou-se maior proporção de células positivas para GFP na transfecção com Lipofectamine (8,76±1,48%) em relação a PEI (2,66±0,65%) após 48h. Todos os tratamentos culminaram na total ausência de fluorescência após 384h. Houve diferença (P<0,05) na viabilidade entre as células transfectadas e o controle, mas não entre os métodos de transfecção. Conclui-se que, nas condições testadas, a Lipofectamine^TM 2000 é mais eficiente, porém após 384h ocorre total silenciamento da expressão.